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摘要： : 复杂样品中6种磷脂的多重检测方法，包括HPLC分析：正相硅胶色谱柱，100mm×4.6mm，柱温25℃；洗脱流速1.5mL/min，按体积比，梯度洗脱的流动相为：0.0min，A40％，B57％，C3％；8.0min，A40％，B50％，C10％；15.0min，A40％，B50％，C10％；15.1min，A40％，B57％，B3％；24.0min，A40％，B57％，C3％；其中，流动相A是含0.01～0.08％三乙胺的正己烷，流动相B是异丙醇，流动相C是10～20％的乙酸溶液。本发明的方法操作简单、快速准确、各组分分离良好、重复性高，易于检测实践中应用推广。

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1.复杂样品中6种磷脂的多重检测方法，包括如下步骤：(1)预制待测样品；(2)取检测量的预制待测样品，溶解于氯仿溶液，氮气吹干后精确称取残余物质量，然后将残余物溶于正己烷和异丙醇按照体积比3:1的混合溶剂中，0.22μm孔径的有机相滤膜过滤除杂；(3)HPLC分析：正相硅胶色谱柱，100mm×4.6mm，柱温25℃；洗脱流速1.5mL/min，按体积比，梯度洗脱的流动相为：

0.0min，A 40％，B 57％，C 3％；

8.0min，A 40％，B 50％，C 10％；

15.0min，A 40％，B 50％，C 10％；

15.1min，A 40％，B 57％，C 3％；

24.0min，A 40％，B 57％，C 3％；其中，流动相A是含0.01～0.08％三乙胺的正己烷，流动相B是异丙醇，流动相C是10～20％的乙酸溶液；(4)对比相同条件下磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰胆碱，鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱混合标准品检测结果判定样品检测结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中HPLC分析配合蒸发光检测器进行检测，分流模式，以空气作为雾化气，雾化气流速1.0～2.0L/min；漂移管温度40～50℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中HPLC流动相中，流动相A是含0.04％三乙胺的正己烷，流动相B是异丙醇，流动相C是13％的乙酸溶液。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的发光检测器雾化气流速1.7L/min；漂移管温度45℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的预制待测样品是分离提取样品中的粗总磷脂，包括提取样品总脂及去除其中的中性脂、糖脂和色素的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的预制待测样品包括如下步骤：a.取待测样品组织匀浆，按1g/1ml比例与氯仿-甲醇按照体积比2:1的混合溶剂混合，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得样品总脂；b.样品总脂溶于少量氯仿进行硅胶柱层析，4～6倍柱体积的氯仿洗脱中性脂，2～4倍柱体积丙酮洗脱糖脂和色素，然后用甲醇洗脱；c.甲醇洗脱组分溶于氯仿，-20℃冷冻保存，即得预制待测样品。